Дистанционные возможности и достижения

Results: Effect of rTM EGF3-6 mutants on breast cancer cell invasion

We sought to determine which substrate of the thrombin/TM complex is responsible for the anti-

metastatic effects of TM. To do so we generated mutants of TM that can either support only TAFI 

activation or only PC activation. Using site-directed mutagenesis, Wang et al. previously determined 

residues of TM that are crucial for thrombin/TM-mediated activation of TAFI and PC. Mutagenesis 

of V340/D341A abolishes TM cofactor activity for TAFI activation. Mutagenesis of F376A inhibits 

activation of PC by thrombin/TM. We generated these mutants in the context of a truncated variants 

of rTM, EGF3-6, since the minimum essential structure of TM necessary for activation of TAFI is 

the c-loop of EGF-3 to EGF6. To verify the effects of the mutations in these novel rTM constructs, 

TAFI and PC were activated by thrombin in the presence of the rTM variants and activity assays 

were completed to assess activity of each enzyme. The mutants behaved as previously published and 

rTM EGF3-6  behaved similar to the TM control (data not shown).  Cell invasion is a measure of 

pro-metastatic behaviour and therefore we examined the effect of the rTM EGF3-6 mutants on breast 

cancer cell invasion. Treatment of MDA-MB-231 cells with rTM EGF3-6 resulted in a significant 

increase in cell invasion. Conversely, treatment of SUM149 cells with rTM EGF3-6 did not affect 

cell invasion. Treatment of both MDA-MB-231 and SUM149 cells with rTM EGF3-6 V340A/D341A 

(the mutant that does not support TAFI activation) increased cell invasion. Furthermore, rTM EGF3-

6 F376A (the mutant that does not support PC activation) significantly decreased MDA-MB-231 

invasion when compared to rTM EGF3-6 WT. However, this effect was not observed in SUM149 

cells. These results suggest that the thrombin cofactor ability of TM affects cell invasion. 

References

1.  Komnenov  D,  Scipione  CA,  Bazzi  ZA,  Garabon  JJ,  Koschinsky  ML,  Boffa  MB:  Pro-

inflammatory  cytokines  reduce  human  TAFI  expression  via  tristetraprolin-mediated  mRNA 

destabilisation and decreased binding of HuR. Thromb Haemost 2015

2.  Boffa MB, Koschinsky ML: Curiouser and curiouser: recent advances in measurement of 

thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) and in understanding its molecular genetics, gene 

regulation, and biological roles. Clin Biochem 2007

3.  Williams CB, Yeh ES, Soloff AC: Tumor-associated macrophages: unwitting accomplices in 

breast cancer malignancy. NPJ breast cancer 2016

4.  Kaftan O, Kasapoglu B, Koroglu M, Kosar A, Yalcin SK: Thrombin-activatable fibrinolysis 

inhibitor in breast cancer patients. Med Princ Pract 2011

5.  Wang W, Nagashima M, Schneider M, Morser J, Nesheim M: Elements of the primary structure 

of thrombomodulin required for efficient thrombin-activable fibrinolysis inhibitor activation. J Biol 

Chem 2000

6.  Binette  TM,  Taylor  FB,  Jr.,  Peer  G,  Bajzar  L:  Thrombin-thrombomodulin connects 

coagulation and fibrinolysis: more than an in vitro phenomenon. Blood 2007

---

МЕЖДУНАРОДНАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ

ДИСТАНЦИОННЫЕ 

ВОЗМОЖНОСТИ И ДОСТИЖЕНИЯ 

НАУКИ

(Март-апрель 2021)

г.Киев 2021