Мавзу. Геномнинг ДНК даражасидаги таҳлили

ДНК ажратиш учун тўқима танлаш. ҳужайралар сони кам ва ДНК миқдори кўп бўладиганларини, имкон даражасида ДНК тўқимадан осон ажраладиган шунингдек, ҳужайралари оқсиллар, липидлар ёки полисахаридлар билан тўйинмаган бўлиши керак.

Тўқималарни ҳужайра даражасигачага парчалаш. ДНК тўқимасини ҳужайралар даражасигача парчалаш учун уни фарфор идишга солинади ва устига -80⁰C ли суюлтирилган азот қуйилиб, чинни ховонча ёрдамида эзилади.

Йирик молекулаларнинг ажралиши.

Ҳужайра мембранаси ва унинг ядросини эритиш учун 65⁰C хароратда 45 дақиқа давомида 2хCТАВ буфферида инкубация қилинди.

• 
  Оқсиллардан тозалаш. хлороформ: изоамил спирти (24:1) аралашмаси қўшилиб, Сентрафуга қилинади. Супернатант янги пробиркага олинади ва устига (суюқликдаги ДНКни ивиши учун) CТАВ пресипитация буфферидан қўшилади.
  
• 
  ДНК суспензиясини РНК дан тозалаш. РНКаза фрагменти қўшилган юқори тузли буффер билан қайта ишланади.
  
• 
  ДНК молекулаларини чўктириш. 96% ли этил спирти қўшилади. ДНК центрафугада чўктириб олинади.
  
• 
  ДНК ни тузлардан тозалаш ва эритиш. 70% ли этил спирти билан икки маротаба ювилади.
  

Полимераза занжир реакцияси (PZR). Полимераза занжир реакцияси (PZR) методи молекуляр биологияда жуда муҳим ўрин тутиб, ушбу усул 1983- йили Колифорниядаги Сетус компаниясининг биохимиги Кери Мюллис томонидан кашф этилган. Бу кашфиёти учун Кери Мюллис 1993-йилда Нобел мукофотига сазовор бўлган. Бу усулнинг яратилишига ДНК полимераза ферментининг яратилиши сабаб бўлган. Ушбу фермент ПЗР методи бўйича борадиган анализ жараёнларини катализлайди ва назорат қилади. Бу ферментнинг муҳим аҳамияти шундаки, у иссиқликка чидамли бўлиб, анча юқори ҳароратда ҳам ўз фаоллигини йўқотмайди. Унинг фаоллигини намоён қилувчи оптимал температура 72С.
ПЗР анализи 3та босқичда амалга ошади:

•