|
Viruslarni tekshirish usullari.
Virusli zarralarni tavsiflash uchun fizik va fizik-kimyoviy usullar keng qo'llaniladi. Ulardan foydalanib, virus zarrasining o'zi va uning tarkibiy qismlarining o'lchamini, shaklini, cho'kindi koeffitsientini, diffuziya koeffitsientini, zichligini va molekulyar og'irligini aniqlash mumkin.
Guruch. 1. Viruslarning tuzilishi va simmetriyaning asosiy turlari. A - simmetriyaning ikazaedral turiga ega bo'lgan konvertsiz virus; B - simmetriyaning ikazaedral turi bilan qoplangan virus; B - simmetriyaning spiral turiga ega bo'lgan konvertsiz virus; G - spiral simmetriya turiga ega bo'lgan konvertli virus.
Virusli zarrachalar hajmini aniqlash uchun quyidagilar qo'llaniladi: virus o'z ichiga olgan materialni membranalar orqali filtrlash, ultratsentrifugalash, elektroforez, elektron mikroskopiya.
Kollodiya membranalari orqali filtrlash.Usul virusli materialni ma'lum bo'lgan teshik o'lchamiga ega bo'lgan membranalardan o'tkazishga asoslangan. Bu holda virusli zarrachaning o'lchami juda taxminan aniqlanadi.
Ultratsentrifugalash orqali cho'ktirish.Virionlar hajmini aniqlashning ko'plab usullari ularning suspenziyali suyuqlikdagi harakat tezligini tahlil qilishga asoslangan. Suyuqlikda to'xtatilgan zarralar turli tezlikda cho'kadi, shuning uchun suspenziyaning tarkibiy qismlarini sentrifugalash orqali tezda ajratish mumkin. Zarrachaning cho'kish tezligi zarrachalar va suyuqlik orasidagi zichlik farqiga, burchak tezligi kvadratiga va aylana radiusi kvadratiga to'g'ridan-to'g'ri proportsional va suyuqlikning yopishqoqligiga teskari proportsionaldir. Cho'kish tezligi cho'kma zarrachalarining shakliga bog'liq. Zichligi d0 bo'lgan suyuqlikda joylashgan radiusi r bo'lgan sharsimon zarracha, agar zarracha zichligi d dan katta bo'lsa, tortishish maydonida yoki markazdan qochma kuchlar maydonida cho'kadi.
r =√9 v ŋ 2s( d - d0), bu yerda
r - zarrachalar radiusi, v - zarrachalarning cho'kish tezligi, ŋ - o'rtacha yopishqoqlik, c - markazdan qochma tezlashuv, d - zarrachalar zichligi, d0 - suyuqlik zichligi. Bu tenglik Stokes formulasidan kelib chiqadi va ideal sharoitda suyuqlikdagi sferik zarrachalarning harakatini tavsiflaydi. S = v / s qiymati cho'kindi konstantasi deb ataladi va ma'lum haroratda berilgan zarrachaning ma'lum muhitdagi harakatini tavsiflaydi. Cho'kma konstantasi Svedberg birliklarida ifodalanadi, Svedbergning bir birligi markazdan qochma kuch birligi ta'sirida 20 ° C da suvda cho'kish tezligiga to'g'ri keladi. Santrifüj kuchini, muhitning zichligini va uning yopishqoqligini o'lchash mumkin bo'lganligi sababli, sferik zarrachaning radiusi va massasini, agar biz uning zichligi va cho'kish tezligini sentrifugada o'lchashimiz mumkin bo'lsa, aniqlash mumkin. Viruslar yuqori tezlikda ishlaydigan ultratsentrifugalarda (60 000 rpm va undan yuqori) yaxshi cho'kadi. Ko'rinadigan yoki ultrabinafsha nurlar dastasi shaffof devorlari bo'lgan santrifüj xujayralari orqali o'tadigan analitik rotorlardan foydalangan holda, santrifuga harakatlanayotganda o'lchovlarni olish mumkin. Yorug'likni yutuvchi zarrachalarning (virionlarning) bir hil populyatsiyasini cho'ktirish jarayonida keskin harakatlanuvchi chegara hosil bo'ladi, uning holati to'g'ridan-to'g'ri yorug'likning yutilishini o'lchash yo'li bilan yoki yorug'likning sinishi ko'rsatkichi bo'lgan hududning holati bilan belgilanadi. suyuqlik keskin o'zgaradi.Elektron mikroskopda bevosita tekshirish. Elektron mikroskopiya virusli zarrachalar hajmini aniqlashning eng keng tarqalgan usuli hisoblanadi. Buning uchun elektron mikrograflardagi kattalashtirishni ichki marker yordamida kalibrlash kerak. Shu maqsadda o'rtacha uzunligi 300 nm va spiral qadami 2,3 nm bo'lgan tamaki mozaikasi virusi zarralaridan foydalanish mumkin; sarum albumin - 5 nm; globulin - 7 nm; gemosiyanin - 23 nm. Usul juda tez, sodda va nafaqat virionlarning hajmini, balki qisman ularning shakli va simmetriyasini ham baholashga imkon beradi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
