Mavzu: Molekulyar biologiyaning metodlari Reja

Jel elektroforezi

Ikki foiz agaroza jeli yilda borat tampon to'qimasi jel laganda.
Jel elektroforezi molekulyar biologiyaning asosiy vositalaridan biridir. Asosiy printsip shundan iboratki, DNK, RNK va oqsillarni elektr maydon va kattalik yordamida ajratish mumkin. Yilda agarozli gel elektroforez, DNKni elektr zaryadlangan agaroza jeli orqali o'tkazish orqali DNK va RNKni kattaligi asosida ajratish mumkin. Oqsillarni o'lchamlari bo'yicha an yordamida ajratish mumkin SDS-PAGE jel, yoki ularning hajmi va ularning asosida elektr zaryadi a deb nomlanuvchi narsani ishlatib 2D gel elektroforezi.^[18]
Makromolekulani tozalash va tekshirish
Shartlar shimoliy, g'arbiy va sharqiy blotting dastlab bu atamada o'ynagan molekulyar biologiya hazilidan kelib chiqadi Janubiy blottingtomonidan tasvirlangan texnikadan so'ng Edvin Janubiy qoralangan DNKning duragaylanishi uchun. Patrisiya Tomas, keyinchalik RNK-ni ishlab chiqaruvchisi deb nomlandi shimoliy blot, aslida bu atamani ishlatmagan.^[19]
Janubiy blotting
Uning ixtirochisi, biolog nomi bilan atalgan Edvin Janubiy, Janubiy blot DNK namunasi ichida ma'lum bir DNK ketma-ketligini tekshirish uchun usul. Oldin yoki keyin DNK namunalari cheklash fermenti (restriksiyon endonukleaza) hazm qilish jel elektroforezi bilan ajratiladi va keyin blotlash orqali membranaga o'tkaziladi. kapillyar harakatlar. Keyin membrana qiziqtirilgan DNKdagi ketma-ketlikni to'ldiruvchi bazaviy ketma-ketlikka ega bo'lgan etiketli DNK zondiga duchor bo'ladi.^[20] Laboratoriya fanida janubiy blotting kamroq qo'llaniladi, masalan, boshqa texnikaning imkoniyatlari tufayli PCR, DNK namunalaridan o'ziga xos DNK ketma-ketliklarini aniqlash. Ushbu qoralanganlar hali ham ba'zi dasturlarda, masalan, o'lchash uchun ishlatiladi transgen nusxa ko'chirish transgen sichqonlar yoki muhandislikda genlarni nokaut qilish embrional ildiz hujayralari chiziqlari.^[21]
Shimoliy blotting

Shimoliy blot diagrammasi
The shimoliy blot ma'lum bir turdagi RNK molekulalarining ekspression naqshlarini o'rganish uchun RNKning turli xil namunalari to'plami o'rtasida taqqoslash sifatida ishlatiladi. Bu aslida kombinatsiyadir denaturing RNK gel elektroforeziva a tozalash. Ushbu jarayonda RNK kattaligiga qarab ajratiladi va keyin membranaga o'tkaziladi, so'ngra markirovka bilan prob qilinadi to'ldiruvchi qiziqish ketma-ketligi. Natijalar ishlatilgan yorliqqa qarab turli yo'llar bilan tasavvur qilinishi mumkin; ammo, aksariyat hollarda namunada aniqlangan RNK o'lchamlarini ifodalaydigan bantlar paydo bo'lishiga olib keladi. Ushbu bantlarning intensivligi tahlil qilingan namunalardagi maqsadli RNK miqdori bilan bog'liq. Ushbu protsedura odatda turli xil namunalarda ushbu RNKning qancha miqdorini o'lchash orqali genlarning ekspressioni qachon va qancha vaqt sodir bo'lishini o'rganish uchun ishlatiladi. Bu tirik to'qimalarda ma'lum genlar qaysi vaqtda va qanday sharoitda namoyon bo'lishini aniqlashning eng asosiy vositalaridan biridir.^[22][23]